尊龙凯时猪蓝耳荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法）使用说明书

产品信息

产品名称：猪蓝耳荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法）
英文名称：Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
包装规格：50T/盒

预期用途

本试剂盒利用实时荧光PCR原理，旨在定性检测猪蓝耳病病毒，对该病毒的诊断及疗效评估提供重要的指导意义。

原理

本试剂盒设计了特异性的引物和探针，针对猪蓝耳病病毒的高度保守区域。在PCR反应体系中，若存在猪蓝耳病病毒基因组模板，则反应得以进行并释放荧光信号。利用荧光定量PCR仪，对相应通道信号进行实时监测和输出，以实现检测结果的定性分析。

试剂盒组成

50T/盒内容：
1. PRRSV RT-PCR反应液 875 μL × 1管
2. PRRSV混合酶液 125 μL × 1管
3. PRRSV阳性对照 40 μL × 1管
4. PRRSV阴性对照 40 μL × 1管
5. 使用说明书 1份
（注：阴性对照为灭菌纯水，阳性对照为含猪蓝耳靶基因的质粒。）

储存条件及有效期

应避光保存于-20℃以下，避免反复冻融，有效期12个月。

适用仪器

可在ABI系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪上使用。

样本要求

1. 血液或血清样品：采用无菌注射器抽取样本，置入离心管中待检。
2. 肺脏、淋巴结及脾脏样品：取样本20g，加入少量灭菌PBS，用无菌研磨器研磨成糊状，再用4倍体积的PBS稀释成乳剂，8000rpm于4℃离心10分钟，取上清待检。
3. 应避免样本间的交叉污染。
4. 样本提取后应立即检测，若不可立即检测，可在2～8℃下冷藏过夜；如需长期保存，则应在-80℃以下冻存，避免反复冻融。

检验方法

1. **试剂准备**（试剂准备区）：
(1) 从冰箱中取出试剂盒，充分解冻并离心以去除管壁附着液体。
(2) 计算反应数（n），并依据反应体系计算所需各试剂量。
(3) 将试剂混合后，分装至PCR反应管中。

2. **样本准备**（样本处理区）：
使用QIAGEN或Roche公司RNA提取试剂盒提取RNA，具体操作参照其说明书。

3. **加样**：在反应管中加入处理好的待测标本RNA各5μL，终体积25μL，盖好PCR反应盖并低速离心后转移到PCR仪器上。

4. **PCR**（PCR扩增区）：
将样本管放入PCR仪器相应槽内，并按设置参数进行PCR扩增，记录放置顺序。

检验结果的解释

通道及检测结果：
FAM+：标本中检出猪蓝耳病病毒
-：标本中未检出猪蓝耳病病毒

注意事项

使用本试剂盒的实验室应严格遵守基因扩增检验实验室管理规范；为避免RNA降解，操作应在0-4℃条件下进行，所有器具均应经过无核酶处理；采用专用器具并避免交叉使用；在检测结束后及时清洁工作台；吸取反应液时应尽量避免气泡产生；使用过程中应避免直接接触PCR反应管，确保检测的准确性。
在检测中的所有仪器设置应符合说明书要求，并在产品有效期内使用。

利用尊龙凯时猪蓝耳荧光PCR检测试剂盒，精准、高效的猪蓝耳病病毒检测将为畜牧业健康提供坚实保障！