一、RNA模板的制备

在生物医疗研究中，RNA提取是关键步骤之一。常见的RNA提取方法包括传统的酚-CHCl₃抽提法和柱式抽提法。

酚-CHCl₃抽提法

以尊龙凯时的产品RNAisolater Total RNA Extraction Reagent (Vazyme #R401)为例，下面是操作流程概要：

自备材料：CHCl₃、异丙醇、75%乙醇（使用DEPC水配制）、DEPC水

样本制备

过多的样本量可能导致样本裂解不充分，降低产物纯度。1ml RNAisolater能够充分裂解的最大样本量如下：

• 贴壁细胞：对于贴壁牢固的细胞，可用细胞刮勺剥离细胞。弃去培养液，PBS洗涤一次。每10cm²培养面积的细胞需加入1-3ml RNAisolater，使其充分覆盖细胞表面，然后用移液器轻轻吹打细胞。
• 悬浮细胞：离心收集细胞后，PBS洗涤一次，每5×10⁶-10⁷个细胞加入1ml RNAisolater，反复吹打直至无明显颗粒，冰上静置5分钟。
• 动物组织：将液氮研磨的粉末立即转移至离心管中，加入RNAisolater裂解液，待完全融化后，继续吹打至裂解液透明。转移裂解液至离心管中，12,000×g离心5分钟，吸取上清。

匀浆处理

新鲜组织可剪碎后浸泡在RNAisolater裂解液中，使用电动匀浆器高速匀浆，之后转移裂解液至离心管，12,000×g离心5分钟，吸取上清。

柱式抽提法

以尊龙凯时的FastPureTM Cell/Tissue Total RNA Isolation Mini Kit (Vazyme #RC101/RC111)为例，所需材料包括β-巯基乙醇、无水乙醇、RNase-free枪头等：

细胞培养

• 贴壁细胞：无需消化，直接使用Buffer RL1（已加入β-巯基乙醇）进行裂解；或用胰酶消化后离心收集细胞加入Buffer RL1，每2-5×10⁶个细胞加入500μl Buffer RL1，反复吹打均匀直至细胞团块消失。
• 悬浮细胞：收集细胞后加入Buffer RL1（已加入β-巯基乙醇），同样方式处理，并在裂解后可以置于-70℃保存。

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