尊龙凯时致力于为生物医药领域提供优质的产品与技术服务，其中RNA模板的制备是关键步骤之一。以下是两种常见的RNA提取方法：传统的酚-氯仿抽提法和柱式抽提法。

一、RNA模板的制备

1. 酚-氯仿抽提法

以尊龙凯时的RNAisolater总RNA提取试剂（Vazyme#R401）为例，此方法常用在各种样本的RNA提取中。

自备材料

CHCl₃、异丙醇、75%乙醇（使用DEPC水配置）、DEPC水。

样本制备

注意：样本量过大会导致裂解不足，降低RNA的纯度。每1ml RNAisolater适合的最大样本量如下：
- 贴壁细胞：弃去培养液，重复用PBS洗涤一次。对于贴壁细胞，可使用细胞刮刀剥离细胞。每10cm²的培养面积加入1-3ml RNAisolater，确保完全覆盖细胞表面，然后用移液器将细胞打散。
- 悬浮细胞：先进行离心收集细胞后，加入1ml RNAisolater，每5×10⁶-10⁷个细胞加入此体积，并用移液器反复吹打，确保没有明显颗粒。待上述步骤完成后，冰上静置5分钟。

动物组织处理

液氮研磨：将粉末立即转移至离心管，加入RNAisolater裂解液，静置，待融化后再继续吹打至透明。然后，执行12,000×g 4℃离心5分钟，吸取上清。
匀浆处理：新鲜组织剪碎后浸泡于RNAisolater裂解液中，高速匀浆，确保组织均匀后移至离心管，执行相同的离心操作。

2. 柱式抽提法

以尊龙凯时的FastPureTM细胞/组织总RNA isolation mini kit（Vazyme#RC101/RC111）为例，这种方法快速且高效，适用于各种细胞类型。

自备材料

β-巯基乙醇、无水乙醇、无RNase枪头等。

细胞处理

- 对于贴壁细胞，无需消化，直接使用Buffer RL1（加入β-巯基乙醇）进行裂解；如果使用胰酶消化，先离心收集细胞后再加入Buffer RL1（每2-5×10⁶个细胞加入500μl）。 - 悬浮细胞直接离心收集后，适量Buffer RL1加入同样的体积，并确保细胞完全裂解。如果不进行后续操作，可将样本置于-70℃保存。

尊龙凯时（广州）科技技术有限公司专注于为生物医药领域提供创新产品和优质服务。我们在全国范围内拥有广泛的技术支持和服务网络，致力于成为基因与细胞治疗领域的领导者。我们的产品和技术将帮助科研人员在生物学研究中取得更大的成就。